直接肉汤药敏试验在猪病防治中的应用研究[摘要]目的对新开发的直接肉汤药敏试验方法，通过发病猪场的临床应用，证明具有操作简便、快速，可定量的特点，能及时筛选出敏感兽药，为临床兽医防治疾病提供新思路。方法制备药敏培养基：采集及制备待检样品：配制试验兽药剂量：进行直接肉汤药敏试验，筛选敏感兽药，指导临床合理应用。结果6个试验组筛选的敏感兽药与临床疗效高度相符，药敏试验前后防治效果的差异极其显著：待检样品中细菌分别对试验猪场常用兽药有一定耐药性；直接肉汤药敏试验的重复性和稳定性高，准确率>97%。结论直接肉汤药敏试验方法具有较高的临床应用价值，筛选并合理使用敏感药物，能显著提高临床治疗效果。[关键词]药敏试验：敏感兽药：临床疗效：应用价值近年来，我国猪场经常流行或散发不明原因的高热、拒食、呼吸困难、皮肤发红等症状的生猪疫病。据报道主要由猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒、猪丹毒杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪多杀性巴氏杆菌等病原混合感染引起。实验室诊断生猪疫病后，一般采用纸片扩散法或肉汤稀释法对分离菌株进行药敏试验，但前者只能定性检测细菌药敏性，后者能定量检测药物最小杀菌浓度和最小抑菌浓度，要求条件较高，操作繁琐，耗时较长，一般5以上才能得出确诊和药敏结果。在药敏结果出来前，仅凭兽医经验防治复杂疫病，往往导致延误最佳治疗时间，造成疫情反复、损失巨大。故实验室常规诊断及药敏试验方法在兽医临床应用上的价值受到限制。为了寻求操作简便快速、临床实用、可定量，重复性和稳定性高的药敏试验方法，我们成功研发了直接肉汤药敏试验方法，取得了理想的治疗效果，为兽医临床工作者有效控制动物疫情提供了新思路。1材料与方法1.1制备药敏培养基选择《细菌干粉培养基》(Muel1er-Hinton Broth,简称M肉汤)，购自杭州天和微生物试剂有限公司，产品执行标准：YZB/浙0660-2009,培养基成分符合GB4789-28的要求，外观为细粉末状，产品批号在有效期内，pH7.4,用于抗生素敏感试验。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。准确称取干粉培养基36g,加入到1000m1蒸馏水中，煮沸充分溶解，补足水分，过滤、准确分装到小试管，每管5m1,盖上硅胶塞。121℃灭菌30min,37℃培养20h,无菌检验合格的放入4℃冰箱备用。1.2试验分组、采集并制备待检样品2012年11月~2013年10月，先后在6个发病猪场进行了试验，各组扑杀典型发病猪2一3头，无菌采集心包渗出液、胸腔积液等，每份病料采集1~2m1,混合后作为待检样品。试验组1初步诊断为猪肺疫、猪伪狂犬病，无菌采集3例病猪的心包液混合物。试验组2初步诊断为猪出血性胸膜肺炎、猪蓝耳病，无菌采集2例病猪的胸腔积液混合物。试验组3初步诊断为猪肺疫、猪蓝耳病，无菌采集3例病猪的胸腔积液混合物。试验组4初步诊断为猪出血性胸膜肺炎、猪气喘病，无菌采集2例病猪的胸腔积液混合物。试验组5初步诊断为副猪嗜血杆菌病、猪气喘病，无菌采集2例病猪的胸腔积液混合物。试验组6初步诊断为副猪嗜血杆菌病、猪出血性胸膜肺炎、猪气喘病，无菌采集2例病猪的胸腔积液混合物。1.3试验兽药剂量的配制液体制剂的临床治疗剂量0.1~0.2m1/kgBW(每公斤体重)，试验选用高限0.2ml/kgBW,以M肉汤培养液5ml(5g)代表1kgBW,5mlM肉汤试验管中应加入试验兽药原液1u1。固体制剂的临床治疗剂量是3mg/kgBW,5ml(5g)M肉汤中应加入15ug兽药。1.3.1头孢噻呋钠江西金康佳生化药业有限公司，批号20120718，规格0.5g/瓶，临床治疗3mg/kgBW,配制为试验剂量15ug/5ml。1.3.2复方氨苄西林湖北省武当动物药业有限公司，批号20120701,规格0.5g/瓶，临床治疗3mg/kgBW,配制为15ug/5m1。1.3.3庆大霉素杭州钱浪药业有限公司，批号20120601，规格8万IU/2ml,临床治疗0.1m1/kgBW,配制为0.5u1/5ml。1.3.4替米考星江西金康佳生化药业有限公司，批号20120608，规格3g/10m1,临床治疗0.15m1/kgBW,配制为0.75u1/5m1。1.3.5林可霉素湖北省武当动物药业有限公司，批号20120823，规格3.0g/10m1,临床治疗剂量0.1ml/kgBW,配制为0.5ul/5ml。1.3.6氟苯尼考湖北省武当动物药业有限公司，批号20120720，规格2g/10m1,临床治疗0.1ml/kgBW,配制为0.5ul/5ml。1.3.7疏酸粘菌素湖南伟达生物科技有限公司，批号20120309，规格150万IU/2m1,临床治疗0.1ml/kgBW,配制为0.5u1/5m1。1.3.810%恩诺沙星江西金康佳生化药业有限公司，批号20120430，规格1g/10m1,临床治疗0.15m1/kgBW,配制为0.75u1/5m1。