长期施肥对土壤微生物量的影响试剂购买序号需要数量试剂名称规格(单位：瓶)备注1牛肉膏500g/瓶12蛋白胨500g/瓶23琼脂500g/瓶44可溶性淀粉500g/瓶2未特别注5葡萄糖500g/瓶2明，所用6氯化钠500g/瓶1化学试剂7硝酸钾100g1均为分析8磷酸氢二钾500g1纯97水硫酸镁500g/瓶110硫酸亚铁500g/瓶111孟加拉红最小包装12链霉素25g/瓶1-213NaOH114HCI1注：链霉素硫酸链霉素庆大霉素25g/瓶2替代品仪器仪器名称规格数量仪器名称规格数量搪瓷杯1移液枪（枪头）151000ml3玻棒3烧杯500ml2100ml3试管10ml70量筒10ml3培养皿200玻璃滴管1玻璃珠三角瓶100ml8漏斗（过滤、培养基）2牛角匙1天平1乳胶管1弹簧夹1称量纸精密PH试纸酒精灯1接种环3记号笔1棉花（橡皮塞）若干高压蒸汽锅1牛皮纸/棉纱线/纱布铁架台（环）1电磁炉（搅拌器）1震荡机1放大镜1培养箱1●培养基及配置方法牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaC15g,琼脂15~20g,水1000ml,pH7.0~7.2,121℃灭菌20min。高氏(Gause)1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g,KN031g,NaCl0.5g,K2HP040.5g,MgS04.7H200.5g,FS040.01g,琼脂20g,水1000ml,pH7.2一7.4。配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。121℃灭菌20min。马丁氏(Martin)琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2P041g,MgS04·7H200.5g,1/3000孟加拉红(rosebengal,.玫瑰红水溶液)100ml,琼脂15~20g,pH自然，蒸馏水800ml,121度灭菌30min。临用前加入0.03%链霉稀释液10ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg。1、称量按培养基配方比例依次准确地称取所需药品放入搪瓷杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，其他的放在称量纸上称量。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。2、溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，在电炉或搅拌器上加热使其溶解。待药品完全溶解后，加入琼脂，直至琼脂完全溶化，补充水分到所需的总体积。3、调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，在用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH或1mol/LHcl,边加边搅拌，使其pH值达到要求。4、分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。5、加塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，（试管7个一组加牛皮纸，棉线包扎：三角烧瓶牛皮纸以活结包扎：摇瓶培养用八层纱布)用记号笔注明培养基名称、组别、日期。6、灭菌将上述培养基以0.103MPa,121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。7、搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。8、无菌检查将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24一48小时，以检查灭菌是否彻底。简要步骤在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持1530分钟。检测方法一、土壤中放线菌的检测1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10g,分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1l移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。如此操作，一直到10-10。稀释。（另外，要知道所称土样的含水量）2、倒人45℃恒温水浴的灭菌高氏〡号培养基，水平放置，凝固待用：分别无菌吸取各样品10-4、10-5、10-6、10-7稀释液，加入灭菌平皿中（每稀释度3皿，每皿m),用玻璃涂布棒涂抹均匀，将平皿倒置于28℃恒温培养箱中培养。放线菌的培养时间较长，故制平板的培养基用量可适当增多3、培养48后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。每克土壤中菌落形成单位=同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。二、土壤中细菌的检测1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10g,分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1ml移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。如此操作，一直到10-10。稀释。（另外，要知道所称土样的含水量）2、分别无菌吸取各样品10-5、10-6、10-7、10-8稀释液，加入灭菌平皿中（每稀释度3皿，每皿m),倒人45℃恒温水浴的灭菌牛肉膏蛋白胨培养基，混匀。（稀释倍数是情况而定)3、待培养基凝固后，将平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养。4、培养24后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。每克土壤中菌落形成单位=同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。三、土壤中真菌的检测1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10g,分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1l移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。如此操作，一直到10-10。稀释。（另外，要知道所称土样的含水量）