维普论文检测系统VIP PAPER CHECK SYSTEM天然化合物库中对293T-KLF4稳定细胞系抗癌药物筛选的初步研究【原文对照报告-大学生版】报告编号：9ac02a21153638d1检测时间：2021-04-2117：17：31检测字符数：7240作者姓名：李依洋所属单位：全文总相似比复写率他引率自引率专业术语检测结论：34.72%26.71%8.01%0.0%0.0%其他指标：自写率：65.28%高频词：细胞，培养，癌症，加入，基因典型相似文章：无指标说明：复写率：相似或疑似重复内容占全文的比重他引率：引用他人的部分占全文的比重自引率：引用自己已发表部分占全文的比重自写率：原创内容占全文的比重典型相似性：相似或疑似重复内容占全文总相似比超过30%专业术语：公式定理、法律条文、行业用语等占全文的比重总相似片段期刊：5博硕：78综合：0相似片段：113外文：0自建库：0互联网：30检测范围：中文科技期刊论文全文数据库中文主要报纸全文数据库中国专利特色数据库博士/硕士学位论文全文数据库中国主要会议论文特色数据库港澳台文献资源外文特色文献数据全库维普优先出版论文全文数据库互联网数据资源/互联网文档资源高校自建资源库图书资源古籍文献资源个人自建资源库年鉴资源IPUB原创作品时间范围：1989-01-01至2021-04-21维普论文检测系统VIP PAPER CHECK SYSTEM原文对照颜色标注说明：■自写片段■复写片段（相似或疑似重复）引用片段（引用）■专业术语（公式定理、法律条文、行业用语等）第一章引言1.1癌症根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)在柳叶刀发布的2020年全球最新癌症数据显示，我国新发癌症人数以及癌症死亡人数均位居全球第一，新发癌症457万人，癌症死亡300万人[1]。1.1.1主要癌症分类如结直肠癌、胃癌、肝癌、宫颈癌等都为全球发病率前十的癌症，皆会对人体产生较大危害，但因其数据与下文大体相似，故在此不再展开详表。肺癌于2020年全球癌症死亡病例共996万例，其中肺癌死亡180万例，远超其他癌症类型，位居癌症死亡人数第一。原发性支气管肺癌，简称肺癌为原发为肺部的恶性肿瘤，无传染性，但有一定的家族聚集性，且易向脑转移形成肺癌脑转移瘤[2]。乳腺癌于2020全球乳腺癌新发病例达到226万例，为世界第一大癌。其中三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)约占所有乳腺恶性肿瘤的20%。TBC是乳腺癌中侵袭性最强的亚型，并且因缺乏靶向治疗，患者预后较差[6,7][3]。由于其高度转移和侵袭性，一旦发生转移，中位总生存率仅为12个月[4]。前列腺癌在2020年新发病例141万例，占男性新发病例总数14.1%。前列腺癌(prostate cancer,PC)是最具侵蚀性的恶性肿瘤之一[]。通过化学或手术去势的雄激素剥夺疗法可以有效的控制前列腺癌，但如果发展为去势抗性前列腺癌(Castration resistant prostate cancer,CRPC),那么现如今并没有针对此有效的治疗方法。1.1.2癌的基本特征癌(cancer)在医学上指起源于上皮细胞的恶性肿瘤，癌细胞是由正常细胞因内外环境因素的作用下经基因突变积累形成的不受机体控制、连续进行分裂的恶行增值细胞，目前发现的突变基因有抑癌基因的53、RB、APC等，癌基因有MIC、FOS、FGFR1等。癌症现如今泛指所有的恶性肿瘤，具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征[6]。1.1.3癌的治疗恶性肿瘤，即癌症，是危害人民健康的一类疾病，通过对肿瘤的早期诊断和治疗，可以显著提高患者的长期生存率，对肿瘤的治疗起到积极作用[5]。但多数患者确诊时，癌症已经发展到了中晚期，最佳治疗时间已经丧失，例如胃癌(gastric cancer,GC)[4]。癌症的治疗包括：手术切除、放疗、化疗、靶向治疗、中医治疗等，其中化疗是目前有效的治疗手段之一，常见的化疗手段是以铂类药物为主的联合化疗方案，通过在癌症部位给药或全身给药的方式抑制癌细胞的生长、增殖，从而延缓患者的病情，提高患者的生存概率[5]。虽然目前化疗在肿瘤临床的治疗中具有良好的效果，但在治疗过程中发现，药物化疗过程中常出现肿瘤耐药，导致化疗效果的不佳甚至治疗失败[5]。1.2KLF4转录因子1.2.1KLF4的基本概念KLF4(Kruppel-like factor4)是锌指蛋白类转录因子家族中的一个转录因子，定位于人体染色体9g31[5],2维普论文检测系统VIP PAPER CHECK SYSTEM在细胞的增殖、分化以及凋亡中起到重要作用。锌指(zinc finger)蛋白，指的是由一个含有约30个氨基酸的环和一个与环上的4个半胱氨酸(Cys)或2个Cys和2个组氨酸(His)配位的Z2+构成，形成的结构像手指状，常出现在DNA结合蛋白质中的一种结构基元。转录因子(transcription factor)是一群能与基因5端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。1.2.2LF4在癌定中的表达转录因子KLF4在人类癌症中是作为一个抑癌基因或癌基因进行表达，在大多数癌症中作为抑癌基因表达[9]，即KL4的表达上调会抑制细胞增殖，诱导细胞调亡，并促进细胞周期停滞，但在某些肿瘤当中，例如乳腺癌中，则具有癌基因特性。即促进肿瘤生长，促进癌细胞去分化和抑制细胞调亡的作用[5]。1.2.3KLF4在癌症中的作用机制KLF4在各个癌症中作用机制不尽而同，例如在胃癌与卵巢癌中起抑癌基因的作用[10-11]，而在口腔鳞癌与乳腺癌中则起到癌基因的作用[12-13]。在胃癌中LAMC1蛋白可促进胃癌细胞的增殖及侵蚀转移能力，而miR-195-5p可靶向结合结合LAMC1mRNA的3UTR区，抑制LAMC1mNA的表达，而KLF4可靶向结合miR-195-5p启动子并促进其进行转录，进而间接调控LAMC1的蛋白表达[10]。KLF4通过下调ET来发挥其抑癌基因作用，ET是指上皮细胞在形态上转化为间质细胞并获得侵袭迁移能力的过程，这是癌症转移中一个基本的过程。在卵巢癌细胞中，KLF4过表达可以抑制转化生长因子-B(TGF-B)诱导的T[11]。肿瘤坏死因子-ā(TNF-a)可以抑制肿瘤细胞的增值，而KF4在口腔鳞癌中表达的上调会抑制TNF-a对细胞增殖的抑制14。在乳腺肿瘤细胞的侵袭与转移过程中KL4起到重要作用，KLF4会促进乳腺癌细胞增殖通过激活糖酵解代谢途径，KLF4的致癌作用取决于p21CIP1/WAF1的状态[13]。1.3293T-KLF4稳转细胞系将实验所需要表达目的基因扩增，克隆进病毒中获得重组质粒，进而感染细胞系或通过基因工程方法获得能够稳定表达的细胞系即为稳转细胞系[15]。在本次实验中所要研究的是药物对于KLF4的影响，故选取KLF4基因、pGL-3质粒载体构建真核基因调控表达元件以及293T细胞作为转入的细胞系。基因表达调控是指通过在半保留复制、转录、翻译及翻译后等多级水平上进行调控，为多级过程[16]。真核细胞的基因表达调控主要通过顺式作用元件和反式作用因子相互作用所实现[17]。本次实验所要进行的药物筛选所用的的基因表达元件是根据其转录水平上对KLF4的表达基础上建立的。其中顺式元件包括起正调控作用的启动子、增强子，起负调控作用的沉默子[18]：反式作用元件则指通过反式作用调控转录的一类因子，即转录因子[19]。293T细胞为人原胚胎肾细胞系293通过腺病毒E1A基因的转染，携带有SV-40大T抗原，可以有效提高外源基因的表达水平，故广泛应用于基因工程[20]。将含有KF4的真核基因表达调控元件，即重组质粒，转染进入293T细胞，使其在293T细胞内稳定表达，进而KLF4被293T细胞高效表达，即构建293T-KLF4稳转细胞系成功。1.4药物筛选1.4.1天然小分子化合物库天然小分析化合物库中包含了从自然界，例如中草药、微生物等，中提取或分离的小分子化合物，21世纪以来，针对天然小分子化合物的筛选是许多新药发明的源泉，为疾病的治疗提供了重要的基础，从植物天然小分子库中筛选出的萜类化合物去氢木香内酯能够抑制破骨细胞生成，防治骨质疏松[21]。从哺乳动物小分子化合物库筛选出的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)能够阻止肿瘤发展和转移[22]。随着高通量高内涵筛选方法地不断优化，大规模筛选天然小分子化合物库成为制备新药最行之有效的方法之一。通过对大量不同化学结构的化合物进行筛选，并对筛选出来的先导化合物做进一步优化，例如衍生物等，将大大加速创新药研发步骤。1.4.2给药筛选293T-KLF4稳转细胞系原理在侵染293T细胞的重组质粒中，KLF4重组质粒中，还包含有双荧光素酶报告基因，即萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶基因[23]。在293T-KLF4稳转细胞系中，KLF4与荧光素酶共同表达，通过酶标仪可以在几秒内测出荧光素酶的活性，故可用测定简单、准确、高效的荧光素酶来体现给药后KLF4的生成情况。3