维普论文检测系统/IP PAPER CHECK SYSTEM拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体的构建【原文对照报告-大学生版】报告编号：fb2bb2fe69f64413检测时间：2021-04-2720：27：40检测字符数：9633作者姓名：余屹所属单位：全文总相似比复写率他引率自引率专业术语检测结论：47.27%43.47%3.8%0.0%0.0%其他指标：自写率：52.73%高频词：片段，进行，蛋白，培养，离心典型相似文章：无指标说明：复写率：相似或疑似重复内容占全文的比重他引率：引用他人的部分占全文的比重自引率：引用自己已发表部分占全文的比重自写率：原创内容占全文的比重典型相似性：相似或疑似重复内容占全文总相似比超过30%专业术语：公式定理、法律条文、行业用语等占全文的比重总相似片段期刊：4博硕：216综合：0相似片段：248外文：0自建库：0互联网：28检测范围：中文科技期刊论文全文数据库中文主要报纸全文数据库中国专利特色数据库博士/硕士学位论文全文数据库中国主要会议论文特色数据库港澳台文献资源外文特色文献数据全库维普优先出版论文全文数据库互联网数据资源/互联网文档资源高校自建资源库图书资源古籍文献资源个人自建资源库年鉴资源IPUB原创作品时间范围：1989-01-01至2021-04-27维普论文检测系统VIP PAPER CHECK SYSTEM原文对照颜色标注说明：■自写片段■复写片段（相似或疑似重复）口引用片段（引用）■专业术语（公式定理、法律条文、行业用语等）编号：17541240523南阳师范学院2021届毕业生毕业论文（设计）突变双分子荧光互补载体的构建完成人：余屹班级：2017-05学制：4年专业：生物工程指导教师：王鹏完成日期：2021-04-20目录摘要(1)0引言(1)1材料与方法(1)1.实验材料(1)1.1.1菌株与载体(1)1.1.2实验仪器及用具(1)1.1.3工具酶、试剂盒与生化试剂(2)1.1.4常用培养基和溶液的配制(2)1.2实验过程与方法(3)1.2.1质粒的提取(3)1.2.2大肠杆菌感受态细胞的制备(4)1.2.3PCR扩增突变片段(4)1.2.4琼脂糖凝胶配置(5)1.2.5目的片段酶切与载体连接（⑤）1.2.6胶▣收提纯步骤(6)1.2.7连接产物转化大肠杆菌感受态细胞(7)1.2.8挑取单克隆进行菌落PCR检测(8)2结果与分析（⑧）2.1PCR扩增目的片段(8)2维普论文检测系统VIP PAPER CHECK SYSTEM2.2转化大肠杆菌与菌落PCR鉴定(10)2.3酶切与检测(11)3讨论(12)3.1钙依赖蛋白激酶CDPK(12)3.2双分子荧光互补技术(12)参考文献(12)Abstract(13)拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体的构建作者：余屹指导老师：王鹏摘要：将含有PGADT?7-CPK4重组载体的E.coli DH5a的菌液进行质粒提取，利用设计好的突变引物，通过聚合酶链式反应(P℃R)的方法获得目的片段，再用琼脂糖凝胶电泳的方法对目的片段进行检测，接着将目的片段进行回收、酶切与连接。再将连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞中，涂布于含有卡那抗性的培养基中培养过夜进行阳性克隆筛选，挑选阳性克隆进行菌落PC鉴定和测序。结果表明：成功构建了拟南芥钙依赖蛋白激酶单磷酸化位点突变双分子荧光互补载体pSPYCE-CPK4N3)。关键词：载体构建；基因突变：PCR:凝胶电泳；酶切0引言Ca2+是植物中重要的第二信使，在植物的新陈代谢和生长发育过程中都发挥着重要的作用[11]。蛋白激酶(protein kinases,简称K)包括蛋白激酶A、蛋白激酶C、蛋白激酶G和钙调蛋白的蛋白激酶，其作用主要是催化蛋白质磷酸化。从ATP中转移的磷酸由蛋白激酶催化，被催化后的磷酸与蛋白质分子中氨基酸残基上的羟基发生共价结合，而达到蛋白质和酶构相和活性发生改变的效果。钙依赖型蛋白激酶(CDK)属于钙调蛋白类的蛋白激酶，是植物中一种特殊的蛋白激酶，对植物的抗逆性起着重要作用。CDPK的表达改变可被部分植物激素例如生长素(IAA)和脱落酸(ABA)等诱导。而CPK4也参与组成钙依赖性蛋白激酶家族并且起着重要作用，也具有深远的研究意义。1材料与方法1.实验材料1.1.1菌株与载体含有pGADT7-CPK4重组质粒的E.coli(Escherichia coli)DH5a、设计好用于引入点突变的CPK4引物、大肠杆菌DH5a感受态、空载体PSPYCE。1.1.2实验仪器及用具-80℃超低温冰箱、4℃冰箱、-20℃低温冰箱、高压灭菌锅、4℃冷冻离心机、培养皿、漩涡震荡仪、核酸电泳槽、PCR仪、电子天平、生化培养箱、试管、恒温水浴锅、恒温摇床、小型离心机、微量移液器、超净工作台、PE管、微波炉、烧杯、量筒、锥形瓶、试管架、酒精灯、金属涂布棒、紫外照胶仪、比色皿、紫外分光光度计等。1.1.3工具酶、试剂盒与生化试剂小量质粒小提试剂盒：OMEGA Plasmid Mini Kit I、胶回收试剂盒：MOEGA Gel Extraction Kit、限制性核酸内切酶BamH I与SalI、T4DNA连接酶：T4 DNA Ligase、Ge1red核酸染料、1XTAE缓冲液、卡那青霉素Kana(在-20C保存)、胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂糖、氯化钠等。PCR引物：设计好基因克隆与表达分析引物序列（由Sangon Biotech公司负责生产），如表1所示。表1基因克隆与表达分析引物序列NamePrimer (5'-3')CP-N3 (F)CAGACTTTGGTTTGGATGTCTTCTACAAGCCCP-N3(R)GGCTTGTAGAAGACATCCAAACCAAAGTCTGCP-YC (F)CGCGGATCCATGGAGAAACCAAACCCTAGCP-YC (R)GCGCGTCGACCTTTGGTGAATCATCAGATTTAG1.1.4常用培养基和溶液的配制3